辛夷6种溶剂顺序提取物对黄瓜灰霉病菌的抑制作用

　　摘要：采用顺序提取法，分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、水6种溶剂对辛夷进行提取。结果表明：去离子水的提取率最大，为12.06%；石油醚次之，为9.63%。采用生长速率法和孢子萌发法分别测定了辛夷6种顺序提取物对黄瓜灰霉病致病菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制效果。结果表明：辛夷6种顺序提取物对灰葡萄孢菌的菌丝生长和孢子萌发均有抑制作用，且对菌丝生长的EC50基本小于1000mg/L，对孢子萌发的EC50均在1300mg/L以上，说明辛夷各溶剂提取物对菌丝生长的抑制效果均优于孢子萌发；石油醚、氯仿和去离子水提取物对菌丝生长和孢子萌发的EC50分别为372.15mg/L和1318.92mg/L，229.84mg/L和1965.50mg/L以及845.44mg/L和4321.80mg/L。

　　关键词：辛夷；顺序提取物；灰葡萄孢菌；抑制作用

　　中图分类号：X文献标识码：A文章编号：1674-1161（2014）09-0009-04

　　植物是生物活性化合物的天然宝库，研究和开发植物源农药是一条研发新农药的有效途径。植物源农药具有易降解、低毒性、对环境污染小等特点，符合当今社会的发展趋势，已成为研究的热点。辛夷是我国一种传统中药，是望春玉兰花蕾的统称[1]。辛夷提取物具有抑菌活性，起抑菌作用的主要活性成分存在于其挥发油中[2-4]。以不同溶剂的辛夷提取物为材料，研究其对黄瓜灰霉病致病菌灰葡萄孢菌（BotrytiscinereaPers.）的菌丝生长和孢子萌发的抑制作用，为辛夷作为植物源农药提供理论依据。

　　1材料与方法

　　1.1辛夷提取物的制备

　　采用索氏提取法[5-6]，选取极性不同的溶剂（石油醚<氯仿<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<水），按照溶剂极性由小到大的顺序，对辛夷依次进行提取。然后，将提取液旋转蒸发浓缩，得到黏稠膏状粗提物，称定质量并计算其提取率。此后，置于4℃冰箱保存。提取率计算公式为：

　　提取率（%）=×100%（1）

　　无菌条件下，用微量二甲基亚砜（不超过总体积2%）分别将6种不同溶剂的提取物充分溶解，再用无菌水配制成40000mg/L的母液。此后，采用二倍稀释法将母液配成40000、20000、10000、5000、2500mg/L等5个浓度梯度。

　　1.2供试菌株

　　灰葡萄孢菌从感染灰霉病的黄瓜上分离、纯化获得，保存于聊城大学农学院植物病理学实验室。

　　1.3离体生物测定

　　1.3.1生长速率法采用生长速率法[7]测定辛夷的6种溶剂提取物对菌丝生长的抑制效果。培养基为含药PDA（葡萄糖-马铃薯-琼脂培养基），空白对照不加药；提取物终浓度分别为4000、2000、1000、500、250mg/L；菌饼直径为0.5cm；十字交叉法测量菌落直径，3次重复。根据菌落直径计算菌丝生长抑制率，公式如下：

　　校正直径=平均直径-菌饼直径（2）

　　抑制率（%）=×100%（3）

　　1.3.2孢子萌发法以孢子萌发法[8]（悬滴法）测定辛夷的6种溶剂提取物对病原菌孢子萌发的抑制作用。提取物终浓度分别为4000，2000，1000，500，250mg/L，3次重复，根据下列公式计算抑制率：

　　萌发率（%）=孢子萌发数/检查孢子总数×100%（4）

　　抑制率（%）=×100%（5）

　　1.4数据分析方法

　　应用MicrosoftExcel软件处理数据；采用SPSS10.0软件建立毒力回归曲线，将抑菌的百分率转换成几率值，浓度转换成对数，进行几率值分析，分别求出辛夷的6种溶剂提取物对灰葡萄孢菌的抑制浓度（EC50）[9]；利用DPSv3.01专业版软件，采用Duncar新复极差法进行差异显著性分析。

　　2结果与分析

　　2.1辛夷提取率

　　采用6种溶剂对辛夷进行顺序提取，计算各样品的提取率，结果如表1所示。

　　提取率的高低反映植物材料在溶剂中溶解量的多少。由表1可以看出：各种溶剂之间的提取率差别较大，其中去离子水对辛夷的提取率最高，为12.06%；石油醚的提取率次之，为9.63%；丙酮的提取率最低，为1.99%。

　　2.2辛夷6种顺序提取物对黄瓜灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用

　　辛夷提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用分别如表2和表3所示。

　　由表2可以看出：辛夷的6种顺序提取物对灰葡萄孢菌的菌丝生长起抑制作用，但各溶剂提取物之间的差距较大；石油醚提取物的抑菌效果最好，其次为丙酮提取物，在4000mg/L浓度时，抑菌率分别为99.19%和97.40%；乙醇的提取物抑菌效果最差，在

　　4000mg/L时，抑菌率仅为76.96%。

　　由表3可以看出：各提取物的相关系数均大于0.9000，相关性较高；EC50最小的是氯仿提取物，为229.84mg/L；其次为丙酮提取物，为316.48mg/L；去离子水的EC50较高，为845.44mg/L；菌丝EC50最高的为乙醇提取物，为1019.82mg/L。相对来说，溶剂极性越小，其提取物对菌丝的抑制效果越明显。

　　2.3辛夷6种顺序提取物对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制作用

　　辛夷提取物对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制浓度（EC50）如表4和表5所示。

　　由表4可以看出：辛夷的6种顺序提取物对灰葡萄孢菌孢子萌发均有抑制作用；在浓度为4000mg/L时，石油醚提取物抑制效果最好，孢子萌发抑制率为79.50%；丙酮提取物与水提取物的抑菌效果都较差，孢子萌发抑制率分别为47.26%和46.17%，均不到50.00%。

　　由表5可以看出：石油醚提取物对孢子萌发的EC50最小，为1318.92mg/L；其次为氯仿提取物，EC50为1965.50mg/L；EC50最大的是水提取物，为

　　4321.80mg/L。由此可以看出，溶剂的极性越小，其提取物对孢子萌发的抑制作用越明显。