四唑染色法测定巨紫荆种子生活力

　　摘要：为探讨巨紫荆（Cercis gigantea）种子生活力的适宜测定方法，采用四唑染色法，以染色浓度、染色温度、染色时间设计正交试验，研究巨紫荆种子的生活力测定条件。结果表明，染色浓度、染色温度、染色时间3者之间存在一定的关系，TTC浓度为0.1%、温度为35 ℃、染色时间为8 h是巨紫荆种子生活力测定的最佳条件。
　　关键词：巨紫荆种子；四唑染色；生活力
　　中图分类号： S339.3+1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0295-03
　　巨紫荆（Cercis gigantea）原产中国浙江、河南、湖北、广东、贵州等地，是现存极少的乡土树种。巨紫荆是高大落叶乔木，高可达15 m，胸径可达40 cm。树干通直，生长整齐，枝展开张，树冠绿荫面积大，覆盖度高，园艺性状突出，适宜作行道树、庭荫树，艺术效果良好。巨紫荆春季满树开淡红或淡紫红花，先花后叶，灿若云锦，观赏效果极佳；夏季叶绿荚红，茵质浓厚；秋季彩叶如霞；冬季落叶后荚果仍然悬挂枝头，尽展生命之劲力。巨紫荆实乃春季观花、夏秋观叶、冬季观果的优良园林树种，是园林绿化中具有广阔应用前景的乡土树种[1]。在小苗培育方面，巨紫荆的出苗率一直不高，播种前用浓硫酸酸蚀再用赤霉素浸泡，其发芽率最高仅有25.5%[2]。准确的生活力测定方法能够真实反映种子的发芽能力，尤其对一些休眠期长的种子更为适用。四唑（2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride，TTC）测定技术是通过鉴定种子内部活组织的染色情况测定种子活力，是国际上公认的测定种子生活力较好的方法，能够快速、有效、准确地反映出种子的生活力，是《国际种子检验规程》中用于测定发芽缓慢或有休眠种子的生活力、快速判断种子潜在发芽能力的一种有效方法[3-5]。
　　本研究利用四唑染色法，设置不同的TTC 浓度、染色温度和时间，研究巨紫荆种子生活力测定的适宜条件，探究巨紫荆种子生活力的快速测定方法，为客观评价巨紫荆的发芽能力，科学预测种子用量以及出苗率等提供理论参考。
　　1材料与方法
　　1.1材料
　　巨紫荆种子于2013年11月12日采自南京林业大学梁希广场前，种子的净度为96.12%，千粒质量为21.50g，含水量为17.15%。
　　1.2TTC染色法
　　1.2.1正交试验采用正交试验设计方法，确定巨紫荆种子生活力测定的适宜条件。选择 TTC 浓度、染色温度（烘箱温度）和时间等直接关系种子活力测定结果的3个因素，并设置3个不同的水平，进行正交试验（表1）。
　　表1TTC染色法测定因素与测定水平
　　水平因素A：TTC浓度
　　（%）B：染色温度
　　（℃）C：染色时间
　　（h）10.1025820.15301230.203516
　　1.2.2TTC溶液配制用超纯水分别将 TTC 配成0.1%、015%、0.2%浓度的溶液，pH 值范围为 6.8～7.2，保存于棕色瓶中。
　　1.2.3浸泡处理随机抽取27份巨紫荆种子，每份50粒，去子叶末端，放置于27个烧杯中，加入25 mL自来水中淹没种子，置于25 ℃恒温培养箱中24 h，待其吸水膨大后取出，用刀片及解剖针剥去种子的3层种皮，取出胚，供染色用。整个操作过程中，所有的种子都置于湿润的脱脂棉上，以保证种子的湿润。
　　1.2.4染色将准备好的每份50粒种胚分别放入27个小烧杯中，共9个处理，每个处理重复3次，加入对应的TTC溶液，分别放入25、30、35 ℃的烘箱中避光染色。达到染色时间后，取出种胚，用清水冲洗，将种胚摆在滤纸上，根据种子染色的部位、染色面积的大小和染色程度，逐粒判断种子的生活力[6]。
　　1.3TTC浓度试验
　　在35 ℃条件下，进行了不同浓度的TTC液（03%、04%、05%）对种子染色数目、染色时间及染色程度的比较试验。
　　1.4种子发芽与生活力测定
　　根据不同的处理方法将随机抽取的巨紫荆种子分为2大组10小组。（1）98%浓硫酸处理组：处理时间分别为10 min（处理1）、15 min（处理2）、20 min（处理3）、25 min（处理4）、30 min（处理5），处理对应时间后，再分别置于流水下冲洗 48 h。（2）热水浸泡48 h组：浸泡温度分别为50 ℃（处理6）、60 ℃（处理7）、70 ℃（处理8）、80 ℃（处理9）、90 ℃（处理10）。每组3个重复，每个重复100粒，处理完毕后进行发芽试验，将种子置于湿润的砂子中，25 ℃培养温度，每天光照 12 h，光照强度 为1600 lx，期间保持发芽盒内砂子湿润[7]。